Προϊόντα

Η βελτιωμένη χρήση αζώτου στα βοοειδή είναι σημαντική προκειμένου να εξασφαλιστεί μια βιώσιμη παραγωγή βοοειδών.Καθώς οι πουρίνες και οι πυριμιδίνες (PP) αποτελούν σημαντικό μέρος του αζώτου της μεγάλης κοιλίας, είναι απαραίτητη η βελτιωμένη κατανόηση της απορρόφησης και του ενδιάμεσου μεταβολισμού της ΡΡ.Η παρούσα εργασία περιγράφει την ανάπτυξη και την επικύρωση μιας ευαίσθητης και ειδικής μεθόδου για τον ταυτόχρονο προσδιορισμό 20 πουρινών (αδενίνη, γουανίνη, γουανοσίνη, ινοσίνη, 2'-δεοξυγουανοσίνη, 2'-δεοξυγουανοσίνη, ξανθίνη, υποξανθίνη), πυριμιδίνες (θυμινετίνη, κυτοσίνη, ουρακίλη, κυτιδίνη, ουριδίνη, θυμιδίνη, 2'-δεοξυουριδίνη) και τα προϊόντα αποικοδόμησής τους (ουρικό οξύ, αλλαντοΐνη, β-αλανίνη, β-ουρεϊδοπροπιονικό οξύ, β-αμινοϊσοβουτυρικό οξύ) στο πλάσμα του αίματος των αγελάδων γαλακτοπαραγωγής.Η τεχνική που βασίζεται σε υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης σε συνδυασμό με τη διαδοχική φασματομετρία μάζας ιονισμού ηλεκτροψεκασμού (LC-MS/MS) συνδυάστηκε με μεμονωμένα πρότυπα βαθμονόμησης που ταιριάζουν με τη μήτρα και σταθερές ισοτοπικά επισημασμένες ενώσεις αναφοράς.Της ποσοτικής ανάλυσης προηγήθηκε μια νέα διαδικασία προεπεξεργασίας που συνίστατο σε καθίζηση με αιθανόλη, διήθηση, εξάτμιση και ανασύσταση.Διερευνήθηκαν οι παράμετροι για το διαχωρισμό και την ανίχνευση κατά την ανάλυση LC-MS/MS.Επιβεβαιώθηκε ότι η χρήση ενός μοντέλου λογαριθμικής βαθμονόμησης αντί για ένα μοντέλο γραμμικής βαθμονόμησης είχε ως αποτέλεσμα χαμηλότερο CV% και η δοκιμή έλλειψης προσαρμογής έδειξε μια ικανοποιητική γραμμική παλινδρόμηση.Η μέθοδος καλύπτει περιοχές συγκεντρώσεων για κάθε μεταβολίτη σύμφωνα με αυτό στα πραγματικά δείγματα, π.χ. γουανίνη: 0,10-5,0 μmol/L και αλλαντοΐνη: 120-500 μmol/L.Το CV% για τις επιλεγμένες περιοχές ποσοτικοποίησης ήταν κάτω από 25%.Η μέθοδος έχει καλή επαναληψιμότητα (CV%≤25%) και ενδιάμεση ακρίβεια (CV%≤25%) και εξαιρετικές ανακτήσεις (91-107%).Όλοι οι μεταβολίτες επέδειξαν καλή μακροπρόθεσμη σταθερότητα και καλή σταθερότητα εντός των μετρήσεων (CV%≤10%).Διαφορετικοί βαθμοί επιδράσεων απόλυτης μήτρας παρατηρήθηκαν στο πλάσμα, τα ούρα και το γάλα.Ο προσδιορισμός των σχετικών επιδράσεων μήτρας αποκάλυψε ότι η μέθοδος ήταν κατάλληλη για όλους σχεδόν τους εξετασθέντες μεταβολίτες της ΡΡ στο πλάσμα που προέρχεται από μια αρτηρία και τις πυλαίες ηπατικές, ηπατικές και γαστροσπληνικές φλέβες και, με λίγες εξαιρέσεις, επίσης για άλλα είδη όπως το κοτόπουλο, ο χοίρος, βιζόν, άνθρωπος και αρουραίος.