Προϊόντα

Η βήτα-D-2'-δεοξυ-2'-φθορο-2'-C-μεθυλκυτιδίνη (PSI-6130) είναι ένας ισχυρός ειδικός αναστολέας της σύνθεσης RNA του ιού της ηπατίτιδας C (HCV) σε κύτταρα αντιγράφου Huh-7.Για την αναστολή της HCV NS5B RNA πολυμεράσης, το PSI-6130 πρέπει να φωσφορυλιωθεί στην 5'-τριφωσφορική μορφή.Διερευνήθηκε η φωσφορυλίωση του PSI-6130 και η αναστολή του HCV NS5B.Η φωσφορυλίωση του PSI-6130 με ανασυνδυασμένη ανθρώπινη κινάση 2'-δεοξυκυτιδίνης (dCK) και κινάση ουριδίνης-κυτιδίνης 1 (UCK-1) μετρήθηκε με χρήση συζευγμένης φασματοφωτομετρικής αντίδρασης.Το PSI-6130 αποδείχθηκε ότι είναι υπόστρωμα για καθαρισμένο dCK, με Km 81 microM και kcat 0,007 s-1, αλλά δεν ήταν υπόστρωμα για το UCK-1.Το μονοφωσφορικό PSI-6130 (PSI-6130-MP) φωσφορυλιώθηκε αποτελεσματικά στο διφωσφορικό και στη συνέχεια στο τριφωσφορικό από ανασυνδυασμένη ανθρώπινη κινάση UMP-CMP και διφωσφορική κινάση νουκλεοζίτη, αντίστοιχα.Μελετήθηκε η αναστολή άγριου τύπου και μεταλλαγμένων (S282T) HCV NS5B RNA πολυμερασών.Η σταθερά αναστολής σταθερής κατάστασης (Ki) για το τριφωσφορικό PSI-61 30 (PSI-6130-TP) με το ένζυμο άγριου τύπου ήταν 4,3 μΜ.Παρόμοια αποτελέσματα λήφθηκαν με τριφωσφορική 2'-C-μεθυλαδενοσίνη (Ki=1,5 μΜ) και τριφωσφορική 2'-C-μεθυλοκυτιδίνη (Ki=1,6 μΜ).Το NS5B με τη μετάλλαξη S282T, η οποία είναι γνωστό ότι προσδίδει αντίσταση στην 2'-C-μεθυλαδενοσίνη, αναστέλλεται από το PSI-6130-TP τόσο αποτελεσματικά όσο και ο άγριος τύπος.Η ενσωμάτωση του PSI-6130-MP σε RNA που καταλύεται από καθαρισμένη NS5B RNA πολυμεράση είχε ως αποτέλεσμα τον τερματισμό της αλυσίδας.