Προϊόντα

Μονογαλακτοπυρανοσίδες φλουορεσκεΐνης και μεθυλεστέρας φλουορεσκεΐνης: σύνθεση, ενζυματική υδρόλυση με βιονυλιωμένη β-γαλακτοσιδάση και προσδιορισμός συντελεστή μεταφραστικής διάχυσης

Οι μονογλυκοσίδες φλουορεσκεΐνης (d-γαλακτοπυρανοσίδη (FMG) και d-γλυκοπυρανοσίδη) και ο μεθυλεστέρας τους (MFMG) έχουν παρασκευαστεί από ακετοβρωμογλυκόζη/γαλακτόζη και μεθυλεστέρα φλουορεσκεΐνης σε καλές αποδόσεις.Έχουν πραγματοποιηθεί πειράματα ενζυματικής υδρόλυσης (χρησιμοποιώντας βιοτινυλιωμένη β-γαλακτοσιδάση) των παραγώγων γαλακτο και υπολογίστηκαν οι κινητικές παράμετροι.Κατά την υδρόλυση έχει παρατηρηθεί αύξηση 15-20 φορές της έντασης φθορισμού.Έχει παρατηρηθεί μια γραμμική αύξηση του φθορισμού σε σύντομο χρονικό διάστημα και χαμηλή συγκέντρωση του υποστρώματος, καθιστώντας αυτές τις ενώσεις χρήσιμες και ευαίσθητους ανιχνευτές για τις γαλακτοσιδάσες.Το μέγεθος της τιμής της σταθεράς Michaelis–Menten (Km) για το MFMG είναι υψηλότερο από αυτό του FMG υποδηλώνοντας μια πιθανή διαμορφωτική αλλαγή του φθορογόνου υποστρώματος.Η τιμή Km για βιοτινυλιωμένη β-Gal με FMG είναι χαμηλότερη από αυτή για το φυσικό ένζυμο.Αυτή η παρατήρηση υποδεικνύει υψηλότερη συγγένεια υποστρώματος του βιοτινυλιωμένου ενζύμου σε σύγκριση με το φυσικό ένζυμο.Οι συντελεστές μεταφραστικής διάχυσης έχουν μετρηθεί, τόσο για τα φθορογόνα υποστρώματα όσο και για τα δύο προϊόντα, χρησιμοποιώντας φασματοσκοπία συσχέτισης φθορισμού.Οι μεταφραστικοί συντελεστές διάχυσης για φθορογόνα υποστρώματα και τα προϊόντα ενζυμικής υδρόλυσης έχουν μετρηθεί ότι είναι παρόμοιοι, στην περιοχή 3,5–4,5 × 10−10 m2 s−1.Επομένως, μια ενίσχυση ή επιβράδυνση της ενζυμικής κινητικής λόγω διαφοράς στη μεταφραστική κινητικότητα του υποστρώματος και του προϊόντος δεν είναι τόσο εμφανής.