Προϊόντα

Η οξειδωτική βλάβη στις βάσεις του DNA έχει συνήθως ως αποτέλεσμα το σχηματισμό οξειδωμένων πουρινών, ιδιαίτερα της 7,8-διυδρο-8-οξογουανίνης (8-oxoG) και της 7,8-διυδρο-8-οξοαδενίνης (8-oxoA). γνωστή μεταλλαξογόνο βλάβη.Δεδομένου ότι το 8-oxoG υπόκειται εύκολα σε περαιτέρω οξείδωση σε σύγκριση με τις κανονικές βάσεις, η εισαγωγή μιας βάσης κατά τη σύνθεση του DNA απέναντι από μια οξειδωμένη μορφή του 8-oxoG διερευνήθηκε in vitro.Ένα συνθετικό πρότυπο που περιείχε μία μόνο βλάβη 8-oxoG υποβλήθηκε αρχικά σε επεξεργασία με διαφορετικά οξειδωτικά ενός ηλεκτρονίου ή υπό συνθήκες απλού οξυγόνου και στη συνέχεια υποβλήθηκε σε επέκταση εκκινητή που καταλύθηκε από το θραύσμα Klenow εξω- (Kf exo-), άλφα DNA πολυμεράσης θύμου μόσχου (pol alpha ) ή ανθρώπινης πολυμεράσης DNA βήτα (pol beta).Σύμφωνα με προηγούμενες αναφορές, τα dAMP και dCMP εισάγονται επιλεκτικά απέναντι από το 8-oxoG και με τις τρεις πολυμεράσες DNA.Είναι ενδιαφέρον ότι η οξείδωση του 8-oxoG βρέθηκε ότι επάγει την εισαγωγή dAMP και dGMP απέναντι από την αλλοίωση από Kf exo- με παροδική αναστολή της επέκτασης του εκκινητή που εμφανίζεται στη θέση της τροποποιημένης βάσης.Επιπλέον, η βλάβη αποτελεί μπλοκ κατά τη σύνθεση του DNA από pol alpha και pol βήτα.Πειράματα με ένα ολιγονουκλεοτίδιο μήτρας τροποποιημένο με 8-oxoA δείχνουν ότι τόσο το 8-oxoA όσο και μια οξειδωμένη μορφή 8-oxoA άμεση εισαγωγή του dTMP από το Kf exo-.Η φασματομετρική ανάλυση μάζας των ολιγονουκλεοτιδίων που περιέχουν 8-oxoG πριν και μετά την οξείδωση με IrCl62-είναι σύμφωνη με την οξείδωση κυρίως της θέσης 8-oxoG, με αποτέλεσμα το σχηματισμό ενός τμήματος γουανιδινοϋδαντοΐνης ως το κύριο προϊόν.Δεν ελήφθησαν στοιχεία για σχηματισμό αβασικών θέσεων.Αυτά τα αποτελέσματα καταδεικνύουν ότι μια οξειδωμένη μορφή 8-oxoG, πιθανώς γουανιδινοϋδαντοΐνη, μπορεί να κατευθύνει την εσφαλμένη ανάγνωση και την εσφαλμένη εισαγωγή των dNTPs κατά τη σύνθεση του DNA.Εάν μια τέτοια διαδικασία συνέβαινε in vivo, θα αντιπροσώπευε μια σημειακή μεταλλαξογόνο βλάβη που οδηγεί σε μετατροπές G-->T και G-->C.Ωστόσο, η αντίστοιχη οξειδωμένη μορφή του 8-oxoA δείχνει κυρίως σωστή εισαγωγή του Τ κατά τη σύνθεση του DNA με Kf εξω-.