Προϊόντα

Η φωσφορυλίωση πρωτεϊνών ρυθμίζει διάφορες κυτταρικές λειτουργίες και παίζει βασικό ρόλο στην πρώιμη ανάπτυξη των φυτών.Για να συμπληρώσουμε και να επεκτείνουμε προηγούμενες έρευνες φωσφορυλίωσης πρωτεϊνών σε σπορόφυτα Arabidopsis, χρησιμοποιήσαμε μια εναλλακτική προσέγγιση που συνδυάζει την εκχύλιση πρωτεΐνης υπό συνθήκες μη μετουσίωσης με τον εμπλουτισμό ακέραιων φωσφοπρωτεϊνών σε εκχυλίσματα χωρίς Rubisco, με χρωματογραφία συγγένειας ακινητοποιημένων ιόντων μετάλλου (IMAC) και ταυτοποίηση χρησιμοποιώντας δισδιάστατη ηλεκτροφόρηση γέλης (2-DE) και υγρή χρωματογραφία-διαδοχική φασματομετρία μάζας (LC-MS/MS).Η πέψη θρυψίνης σε γέλη και η ανάλυση επιλεγμένων κηλίδων γέλης εντόπισαν 144 φωσφορυλιωμένα πεπτίδια και υπολείμματα, από τα οποία μόνο 18 φωσφοπεπτίδια και 8 φωσφοσίτες βρέθηκαν στις βάσεις δεδομένων θέσεων φωσφορυλίωσης PhosPhAt 4.0 και P3DB Arabidopsis thaliana.Περισσότερες από τις μισές από τις 82 ταυτοποιημένες φωσφοπρωτεΐνες εμπλέκονται στο μεταβολισμό των υδατανθράκων, τη φωτοσύνθεση/αναπνοή ή τα μηνύματα μηχανισμών απόκρισης στο οξειδωτικό στρες.Ο εμπλουτισμός ανέπαφων φωσφοπρωτεϊνών πριν από το 2-DE και το LC-MS/MS φαίνεται να ενισχύει την ανίχνευση φωσφορυλιωμένης θρεονίνης και υπολειμμάτων τυροσίνης σε σύγκριση με μεθόδους που χρησιμοποιούν εμπλουτισμό σε επίπεδο πεπτιδίου, υποδηλώνοντας ότι οι δύο προσεγγίσεις είναι κάπως συμπληρωματικές όσον αφορά την κάλυψη της θέσης φωσφορυλίωσης.Συγκρίνοντας τα αποτελέσματα για νεαρά σπορόφυτα με εκείνα που ελήφθησαν προηγουμένως για ώριμα φύλλα Arabidopsis εντόπισαν πέντε πρωτεΐνες που είναι διαφορικά φωσφορυλιωμένες σε αυτούς τους ιστούς, καταδεικνύοντας τη δυνατότητα αυτής της τεχνικής για τη διερεύνηση της δυναμικής της φωσφορυλίωσης πρωτεΐνης κατά την ανάπτυξη του φυτού.