Προϊόντα

Οι πρωτεϊνικές φωσφατάσες σερίνης/θρεονίνης έχουν περιγραφεί σε πολλά παθογόνα βακτήρια ως βασικά ένζυμα που εμπλέκονται σε μονοπάτια μεταγωγής σήματος που εξαρτώνται από τη φωσφορυλίωση και συχνά συνδέονται με τη λοιμογόνο δράση αυτών των οργανισμών.Μια επιθεώρηση του γονιδιώματος του Mycoplasma synoviae αποκάλυψε την παρουσία ενός γονιδίου (prpC) που κωδικοποιεί μια υποτιθέμενη πρωτεϊνική φωσφατάση της υποοικογένειας πρωτεΐνης φωσφατάσης 2C (PP2C).Εδώ, αναφέρουμε έναν πλήρη βιοχημικό χαρακτηρισμό της φωσφατάσης M. synoviae (PrpC) και τον ιδιαίτερο ρόλο των μεταλλικών ιόντων στη σχέση δομής-λειτουργίας αυτού του ενζύμου.Η ανάλυση αλληλουχίας αμινοξέων PrpC αποκάλυψε ότι όλα τα υπολείμματα που εμπλέκονται στο διπυρηνικό κέντρο μετάλλων και τα υποτιθέμενα τρίτα υπολείμματα συντονισμού ιόντων μετάλλου, που διατηρούνται στις φωσφατάσες PP2C, υπάρχουν στο PrpC.Η PrpC είναι μια μονομερής πρωτεΐνη ικανή να αποφωσφορυλιώνει φωσφο-υποστρώματα με εξάρτηση από ιόντα Mn(2+).Η ανάλυση θερμικής σταθερότητας έδειξε τη σταθερότητα του ενζύμου σε ήπιες θερμοκρασίες και την επίδραση των ιόντων Mn(2+) σε αυτή την ιδιότητα.Η ανάλυση φασματομετρίας μάζας έδειξε ότι τρία μεταλλικά ιόντα συνδέονται με το PrpC, δύο από τα οποία με μια φαινομενική σταθερά υψηλής συγγένειας.Η ανάλυση μετάλλαξης των υποτιθέμενων υπολειμμάτων τρίτου συντονισμού μετάλλου, Asp122 και Arg164, αποκάλυψε ότι αυτές οι παραλλαγές εμφάνισαν ασθενέστερη σύνδεση ιόντων μαγγανίου και ότι και οι δύο μεταλλάξεις επηρέασαν τη δραστηριότητα της φωσφατάσης PrpC.Σύμφωνα με αυτά τα αποτελέσματα, το PrpC είναι ένα εξαρτώμενο από μέταλλο μέλος πρωτεϊνικής φωσφατάσης με βελτιωμένη σταθερότητα στην ολομορφή και με Asp122, που πιθανώς εμπλέκεται στην τρίτη θέση δέσμευσης μετάλλου, απαραίτητη για την καταλυτική δραστηριότητα.