Προϊόντα

Το LecA (PA-IL) είναι μια κυτταροτοξική λεκτίνη και προσκολλητίνη που παράγεται από την Pseudomonas aeruginosa η οποία δεσμεύει υδρόφοβους γαλακτοσίδες με υψηλή ειδικότητα και συγγένεια.Χρησιμοποιώντας μια σύντηξη μετάφρασης lecA-egfp και ανάλυση ανοσοστύπωσης της εξωκυτταρικής μήτρας βιοφίλμ, δείχνουμε ότι η lecA εκφράζεται σε κύτταρα που αναπτύσσονται σε βιοφίλμ.Σε δοκιμές στατικής βιοφίλμ τόσο σε πολυστυρένιο όσο και σε ανοξείδωτο χάλυβα, το βάθος και η επιφανειακή κάλυψη του βιοφίλμ μειώθηκαν από τη μετάλλαξη του lecA και ενισχύθηκαν στο στέλεχος PAO-P47 που υπερπαραγωγή LecA.Η κάλυψη επιφάνειας βιοφίλμ από το μητρικό στέλεχος, PAO-P47 αλλά όχι το μετάλλαγμα lecA σε χαλύβδινα κουπόνια παρεμποδίστηκε επίσης από την ανάπτυξη παρουσία είτε ισοπροπυλ-βήτα-D-θειογαλακτοσίδης (IPTG) ή π-νιτροφαινυλ-άλφα-D-γαλακτοσίδης ( NPG).Επιπλέον, ώριμα βιοφίλμ άγριου τύπου που σχηματίζονται απουσία αυτών των υδρόφοβων γαλακτοσιδών θα μπορούσαν να διασπαρούν με την προσθήκη IPTG.Αντίθετα, η προσθήκη ρ-νιτροφαινυλ-άλφα-L-φουκόζης (NPF) η οποία έχει υψηλή συγγένεια για το P. aeruginosa LecB (PA-IIL) lectin δεν είχε καμία επίδραση στον σχηματισμό ή τη διασπορά βιοφίλμ.Η πλαγκτονική ανάπτυξη του P. aeruginosa PAO1 δεν επηρεάστηκε από την παρουσία IPTG, NPG ή NPF, ούτε το στέλεχος ήταν σε θέση να χρησιμοποιήσει αυτά τα σάκχαρα ως πηγές άνθρακα, υποδηλώνοντας ότι τα παρατηρούμενα αποτελέσματα στον σχηματισμό βιοφίλμ οφείλονταν στην ανταγωνιστική αναστολή του συνδέτη LecA δεσμευτικός.Παρόμοια αποτελέσματα λήφθηκαν επίσης για βιοφίλμ που αναπτύσσονται υπό συνθήκες δυναμικής ροής σε χαλύβδινα κουπόνια, υποδηλώνοντας ότι το LecA συμβάλλει στην αρχιτεκτονική βιοφίλμ P. aeruginosa υπό διαφορετικές περιβαλλοντικές συνθήκες.

Μια άλφα-L-φουκοζιδάση (EC 3.2.1.51) ικανή να απελευθερώσει το υπόλειμμα t-fucosyl από την πλευρική αλυσίδα των ολιγοσακχαριτών ξυλογλυκάνης έχει ανιχνευθεί στα φύλλα των φυτών Arabidopsis.Επιπλέον, μια άλφα-L-φουκοσιδάση με παρόμοια εξειδίκευση υποστρώματος καθαρίστηκε από φύλλα λάχανου (Brassica oleracea) για να αποδώσει μια μονή ταινία σε SDS-PAGE.Από αυτή τη ζώνη πρωτεΐνης ελήφθησαν δύο πεπτιδικές αλληλουχίες και χρησιμοποιήθηκαν για την ταυτοποίηση ενός γονιδίου Arabidopsis που κωδικοποιεί μια άλφα-φουκοσιδάση που προτείνουμε να ονομαστεί AtFXG1.Επιπλέον, ένα γονίδιο Arabidopsis με ομολογία με γνωστές άλφα-L-φουκοσιδάσες έχει επίσης βρεθεί και προτείναμε να το ονομάσουμε ως AtFUC1.Τόσο το AtFXG1 όσο και το ATFUC1 εκφράστηκαν ετερόλογα σε κύτταρα Pichia pastoris και οι δραστηριότητες της άλφα-L-φουκοζιδάσης εκκρίθηκαν στο μέσο καλλιέργειας.Η άλφα-L-φουκοζιδάση που κωδικοποιείται από το AtFXG1 ήταν δραστική έναντι των ολιγοσακχαριτών από ξυλογλυκάνη XXFG καθώς και έναντι της 2'-φουκοσυλ-λακτιτόλης αλλά όχι έναντι του π-νιτροφαινυλ-άλφα-L-φουκοπυρανοσίδης.Ωστόσο, το AtFUC1 που εκφραζόταν ετερόλογα ήταν δραστικό μόνο έναντι της 2'-φουκοσυλ-λακτιτόλης.Έτσι, το πρώτο πρέπει να σχετίζεται με το μεταβολισμό της ξυλογλυκάνης.