L-Proline Cas: 147-85-3 99% Λευκή σκόνη
| Αριθμός καταλόγου | XD90293 |
| Ονομασία προϊόντος | L-Προλίνη |
| CAS | 147-85-3 |
| Μοριακός τύπος | C5H9NO2 |
| Μοριακό βάρος | 115.13046 |
| Στοιχεία αποθήκευσης | Περιβάλλων |
| Εναρμονισμένος Δασμολογικός Κώδικας | 29339980 |
Προσδιορισμός προϊόντος
| Χημική δοκιμή | 99% min |
| Εμφάνιση | άσπρη σκόνη |
| Συγκεκριμένη περιστροφή | -84,5 έως -86 |
| Βαριά μέταλλα | <15 σελ./λεπτό |
| AS | <1 σελ./λεπτό |
| Ph | 5,9 - 6,9 |
| SO4 | <0,050% |
| Fe | <30 ppm |
| Απώλεια στο στέγνωμα | <0,3% |
| Υπολείμματα κατά την ανάφλεξη | <0,10% |
| NH4 | <0,02% |
| Cl | <0,050% |
| Κατάσταση Λύσης | >98% |
Η κατανόηση του μεταβολισμού του μικροβιακού ξενιστή είναι απαραίτητη για την ανάπτυξη και τη βελτιστοποίηση βιοκαταλυτικών διεργασιών που βασίζονται σε ολόκληρα κύτταρα, καθώς υπαγορεύει την αποδοτικότητα της παραγωγής.Αυτό ισχύει ιδιαίτερα για τη βιοκατάλυση οξειδοαναγωγής όπου χρησιμοποιούνται μεταβολικά ενεργά κύτταρα λόγω της ενδογενούς αναγεννητικής ικανότητας συμπαράγοντα/συνυποστρώματος στον ξενιστή.Ανασυνδυασμένη Escherichia coli χρησιμοποιήθηκε για την υπερπαραγωγή της προλινο-4-υδροξυλάσης (Ρ4Η), μιας διοξυγενάσης που καταλύει την υδροξυλίωση της ελεύθερης L-προλίνης σε trans-4-υδροξυ-L-προλίνη με α-κετογλουταρικό (a-KG) ως συν-υπόστρωμα.Σε αυτόν τον βιοκαταλύτη ολόκληρων κυττάρων, ο κεντρικός μεταβολισμός του άνθρακα παρέχει το απαιτούμενο συν-υπόστρωμα a-KG, συνδέοντας τη βιοκαταλυτική απόδοση του P4H απευθείας με το μεταβολισμό του άνθρακα και τη μεταβολική δραστηριότητα.Με την εφαρμογή τόσο πειραματικών όσο και εργαλείων υπολογιστικής βιολογίας, όπως η μεταβολική μηχανική και η (13) ανάλυση C-μεταβολικής ροής ((13) C-MFA), ερευνήσαμε και περιγράψαμε ποσοτικά τη φυσιολογική, μεταβολική και βιοενεργειακή απόκριση του βιοκαταλύτη ολόκληρου κυττάρου στη στοχευμένη βιομετατροπή και εντοπίστηκαν πιθανά μεταβολικά σημεία συμφόρησης για περαιτέρω μηχανική ορθολογικής οδού. Κατασκευάστηκε ένα στέλεχος E. coli με έλλειψη αποικοδόμησης προλίνης διαγράφοντας το γονίδιο putA που κωδικοποιεί την αφυδρογονάση προλίνης.Οι βιομετασχηματισμοί ολόκληρων κυττάρων με αυτό το μεταλλαγμένο στέλεχος οδήγησαν όχι μόνο σε ποσοτική υδροξυλίωση προλίνης αλλά και σε διπλασιασμό του ειδικού ρυθμού σχηματισμού trans-4-L-υδροξυπρολίνης (hyp), σε σύγκριση με τον άγριο τύπο.Η ανάλυση της ροής άνθρακα μέσω του κεντρικού μεταβολισμού του μεταλλαγμένου στελέχους αποκάλυψε ότι η αυξημένη ζήτηση a-KG για δραστηριότητα P4H δεν ενίσχυσε τη ροή παραγωγής a-KG, υποδεικνύοντας μια αυστηρά ρυθμισμένη λειτουργία του κύκλου TCA υπό τις συνθήκες που μελετήθηκαν.Στο στέλεχος άγριου τύπου, η σύνθεση και η κατάλυση του P4H προκάλεσε μείωση της απόδοσης βιομάζας.Είναι ενδιαφέρον ότι το στέλεχος ΔputA αντιστάθμισε επιπλέον τη σχετιζόμενη απώλεια ATP και NADH μειώνοντας τις ενεργειακές απαιτήσεις συντήρησης σε συγκριτικά χαμηλούς ρυθμούς πρόσληψης γλυκόζης, αντί να αυξήσει τη δραστηριότητα του TCA. είναι ελπιδοφόρα για παραγωγική κατάλυση P4H όχι μόνο από την άποψη της απόδοσης βιομετασχηματισμού, αλλά και όσον αφορά τα ποσοστά βιομετατροπής και πρόσληψης προλίνης και την απόδοση του hyp στην πηγή ενέργειας.Τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι, μετά από ένα νοκ-άουτ putA, η σύζευξη του κύκλου TCA με την υδροξυλίωση προλίνης μέσω του συνυποστρώματος a-KG γίνεται βασικός παράγοντας περιορισμού και στόχος για περαιτέρω βελτίωση της αποτελεσματικότητας των βιομετασχηματισμών που εξαρτώνται από το a-KG.
