Προϊόντα

Παρόμοια με άλλους ιούς RNA θετικού κλώνου, οι ιοί τάφου αντιγράφονται από το σύμπλοκο ιικής ρεπλικάσης που συνδέεται με τη μεμβράνη (VRC).Το VRC αποτελείται από την κωδικοποιημένη από τον ιό p92 εξαρτώμενη από RNA πολυμεράση RNA (RdRp), τον συνοδό RNA του ιού p33 και αρκετές πρωτεΐνες ξενιστή.Για να γίνει ένα λειτουργικό RdRp μετά τη μετάφρασή του, η πρωτεΐνη αναδιπλασιασμού p92 θα πρέπει να ενσωματωθεί στο VRC, ακολουθούμενη από την ενεργοποίησή της.Έχουμε δείξει προηγουμένως σε μια δοκιμασία με βάση το εκχύλισμα ζυμομύκητα χωρίς κύτταρα ότι η ενεργοποίηση του RdRp του ιού με θάμνους ντομάτας (TBSV) απαιτεί διαλυτό παράγοντα ξενιστή.Σε αυτό το άρθρο, προσδιορίζουμε την κυτταρική πρωτεΐνη θερμικού σοκ 70 (Hsp70) ως τον συνεπιλεγμένο παράγοντα ξενιστή που απαιτείται για την ενεργοποίηση ενός Ν-τερματικά περικομμένου ανασυνδυασμένου TBSV RdRp.Επιπλέον, ο αποκλεισμός της λειτουργίας του Hsp70 με βάση τα μικρά μόριο αναστέλλει τη σύνθεση RNA από τον ιό τάφου RdRp in vitro.Επιπλέον, δείχνουμε ότι τα ουδέτερα φωσφολιπίδια, δηλαδή η φωσφατιδυλαιθανολαμίνη (PE) και η φωσφατιδυλοχολίνη (PC), ενισχύουν την ενεργοποίηση RdRp in vitro.Αντίθετα, η φωσφατιδυλογλυκερόλη (PG) παρουσιάζει ισχυρή και κυρίαρχη ανασταλτική δράση στην in vitro ενεργοποίηση RdRp.Επίσης, αποδεικνύουμε ότι το PE και το PC διεγείρουν την αλληλεπίδραση RdRp ιού συν-κλώνου RNA [(+)RNA], ενώ το PG αναστέλλει τη σύνδεση του ιικού RNA στο RdRp.Με βάση τον διεγερτικό έναντι του ανασταλτικού ρόλου των διαφόρων φωσφολιπιδίων στην ενεργοποίηση RdRp του ιού tombus, προτείνουμε ότι η λιπιδική σύνθεση των στοχευόμενων υποκυτταρικών μεμβρανών μπορεί να χρησιμοποιηθεί από τους tombusviruses για τη ρύθμιση της νέας διάταξης VRC κατά τη διάρκεια της μόλυνσης. Η κωδικοποιημένη από τον ιό RNA πολυμεράση Το (RdRp), το οποίο είναι υπεύθυνο για τη σύνθεση των απογόνων του ιικού RNA σε μολυσμένα κύτταρα αρκετών ιών RNA θετικού κλώνου, είναι αρχικά ανενεργό.Αυτή η στρατηγική είναι πιθανό να αποφύγει τη σύνθεση ιικού RNA στο κυτταρόπλασμα που θα οδηγούσε γρήγορα σε επαγωγή κυτταρικών αντιιικών αποκρίσεων που προκαλούνται από RNA.Κατά τη συναρμολόγηση του συμπλόκου ρεπλικάσης που συνδέεται με τη μεμβράνη, το ιικό RdRp ενεργοποιείται μέσω μιας ατελώς κατανοητής διαδικασίας που καθιστά το RdRp ικανό για σύνθεση RNA.Χρησιμοποιώντας το TBSV RdRp, δείχνουμε ότι ο επιλεγμένος κυτταρικός συνοδός Hsp70 και τα ουδέτερα φωσφολιπίδια διευκολύνουν την ενεργοποίηση του RdRp in vitro.Αντίθετα, η φωσφατιδυλογλυκερόλη (PG) έχει κυρίαρχη ανασταλτική επίδραση στην in vitro ενεργοποίηση RdRp και την αλληλεπίδραση RdRp-ιικού RNA, υποδηλώνοντας ότι η μεμβρανώδης μικροπεριοχή που περιβάλλει την RdRp επηρεάζει σε μεγάλο βαθμό την ικανότητά της για σύνθεση RNA.Έτσι, η ενεργοποίηση του ιικού RdRp πιθανότατα εξαρτάται από πολλαπλά συστατικά ξενιστή σε μολυσμένα κύτταρα.