Προϊόντα

Η τοπολογία μεμβράνης της περιοχής καναλιού κολικίνης Ε1 μελετήθηκε με μεταφορά ενέργειας συντονισμού φθορισμού (FRET).Το FRET περιλάμβανε ένα γενετικά κωδικοποιημένο φθορίζον αμινοξύ (κουμαρίνη) ως δότη και ένα επιλεκτικά επισημασμένο υπόλειμμα κυστεΐνης συνδεδεμένο με DABMI (4-(διμεθυλαμινο)φαινυλαζοφαινυλ-4'-μαλεϊμίδιο) ως δέκτη FRET.Το φθορίζον υπόλειμμα κουμαρίνης ενσωματώθηκε στην πρωτεΐνη μέσω ενός ορθογώνιου ζεύγους συνθετάσης tRNA/αμινοακυλο-tRNA που επέτρεψε την επιλεκτική ενσωμάτωση σε οποιαδήποτε θέση εντός της περιοχής του καναλιού κολικίνης.Κάθε παραλλαγή περιείχε μια μετάλλαξη στοπ (TAG) για ενσωμάτωση κουμαρίνης και μια μετάλλαξη κυστεΐνης (TGT) για προσκόλληση DABMI.Προσδιορίστηκαν έξι ενδοελικοειδείς αποστάσεις εντός των ελίκων 1-6 χρησιμοποιώντας ανάλυση FRET τόσο για τις διαλυτές όσο και για τις δεσμευμένες σε μεμβράνη καταστάσεις.Τα δεδομένα FRET έδειξαν μεγάλες αλλαγές στις διαελικοειδείς αποστάσεις μεταξύ των ελίκων 3-6 κατά τη σύνδεση της μεμβράνης παρέχοντας νέα εικόνα για τη δομή που συνδέεται με τη μεμβράνη της περιοχής καναλιού.Γενικά, οι διαελικοειδείς αποδόσεις κουμαρίνης-DABMI FRET μειώθηκαν κατά τη δέσμευση της μεμβράνης, βασιζόμενοι στο μοντέλο ομπρέλας για το κανάλι κολικίνης.Ένα δοκιμαστικό μοντέλο για την κλειστή κατάσταση του τομέα καναλιού αναπτύχθηκε με βάση τα τρέχοντα και προηγουμένως δημοσιευμένα δεδομένα FRET.Το μοντέλο προτείνει κυκλική διάταξη των ελίκων 1-7 κατά τη φορά των δεικτών του ρολογιού από την εξωκυτταρική πλευρά και τη διεπιφανειακή σύνδεση της μεμβράνης των ελίκων 1, 6, 7 και 10 γύρω από την κεντρική διαμεμβρανική φουρκέτα που σχηματίζεται από τις έλικες 8 και 9.