Προϊόντα

Οι παθογόνες μοριακές οδοί σε κιρρωτικά ηπατικά νοσήματα όπως ο ιός της ηπατίτιδας C (HCV), η αυτοάνοση ηπατίτιδα (AIH) και η πρωτοπαθής χολική κίρρωση (PBC) χαρακτηρίζονται ελάχιστα.Τα διαφορικά εκφραζόμενα γονίδια είναι συχνά σημαντικά στην παθογένεση της νόσου.Ο αφαιρετικός υβριδισμός καταστολής (SSH) είναι μια προσέγγιση σε όλο το γονιδίωμα που εμπλουτίζει τα διαφορικά εκφραζόμενα μεταγραφήματα mRNA.Στόχος μας ήταν να κάνουμε νέες παρατηρήσεις διαφορικής έκφρασης γονιδίων στην κίρρωση χρησιμοποιώντας SSH σε συνδυασμό με ποσοτική αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης της αντίστροφης μεταγραφάσης σε πραγματικό χρόνο (RT-PCR).Τα μεταγραφώματα του ήπατος σε κίρρωση HCV, κίρρωση AIH, PBC και μη πάσχον ηπατικό ιστό εξετάστηκαν με SSH.Οι κλώνοι του συμπληρωματικού DNA (cDNA) που προέκυψαν εξετάστηκαν εκ νέου για διαφορική έκφραση με υβριδισμό κηλίδας κηλίδας και στη συνέχεια αναλύθηκαν η αλληλουχία τους.Η έκφραση του επιλεγμένου γονιδίου ποσοτικοποιήθηκε με RT-PCR σε πραγματικό χρόνο.Μετά την SSH, 694 κλώνοι εξετάστηκαν εκ νέου για διαφορική έκφραση γονιδίου, από τους οποίους 145 αναλύθηκαν ως προς την αλληλουχία τους και βρέθηκε ότι προέρχονται από 89 διαφορετικά γονίδια.Επτά κλώνοι ήταν ομόλογοι μόνο με αλληλουχίες εκφρασμένης ετικέτας αλληλουχίας (EST) που κωδικοποιούν γονίδια που δεν έχουν γνωστή λειτουργία.Η προς τα πάνω ρυθμιζόμενη έκφραση τεσσάρων γονιδίων επιβεβαιώθηκε με RT-PCR σε πραγματικό χρόνο: διαμεμβρανικό μέλος 3 υπεροικογένειας 4 (τετρασπανίνη CO-029) σε όλες τις μορφές κίρρωσης, πρωτεΐνη αλληλεπίδρασης σκαντζόχοιρου (HIP) στην κίρρωση AIH και χιτινάση 3-όπως-1 (HC gp-39 ή ykl-40) και επανάληψη αργινίνης-γλουταμινικού οξέος (RERE) σε κίρρωση HCV.Παρατηρήθηκαν πολυμορφισμοί γονιδίου RERE και παραλλαγές ματίσματος σε όλους τους ιστούς που εξετάστηκαν.Η ανοδική ρύθμιση της τετρασπανίνης CO-029 εντοπίστηκε κυρίως στα χοληφόρα κύτταρα.Συμπερασματικά, νέες παρατηρήσεις της διαφορικής γονιδιακής έκφρασης στην ανθρώπινη κίρρωση έγιναν χρησιμοποιώντας το SSH ως το κύριο εργαλείο ανακάλυψης.Συγκεκριμένα, δικαιολογούνται περαιτέρω μελέτες του γονιδίου RERE και των προϊόντων του σε ηπατική νόσο που σχετίζεται με τον HCV.